洁净手术室沉降法测定沉降菌浓度采样布点法
手术室的级别分为：Ⅰ级手术室，Ⅱ级手术室，Ⅲ级手术室，Ⅳ级手术室。Ⅰ-Ⅲ级手术室有手术区和周边区之分，手术区为需要特别保护的手术台及其周围区域，余下区域均为周边区。Ⅳ级手术室不分手术区和周边区。各级手术室不同区域的空气洁净度级别不同，有5级、6级、7级、8万级及8.5级之分。
GB50333-2013中（13.3.18.4）要求采用沉降法测定沉降菌浓度时，细菌浓度测点数要和被测区域含尘浓度测点数（13.3.11－2）相同，同时应满足表13.3.18-2 规定的最少培养皿（不含对照皿）数的要求。也就是说按这两种方法中布点数多的布点。
表13.3.18-2 沉降菌最小培养皿数
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被测区域洁净度级别 |
每区最小培养皿数(Φ90，以沉降30min 计) |
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5级 |
13 3 |
表 13.3.11-2 测点位置表
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区 域 |
最少测点数 |
手术区图示 |
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Ⅰ级洁净手术室手术区和洁净辅助用房局部5 级区 Ⅰ级 周边区 |
5 点（双对角线布点）
8 点(每边内2 点) |
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Ⅱ～Ⅲ级洁净手术室手术区
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3 点(单对角线布点)
6 点（长边内2 点，短边内1点） |
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Ⅳ级洁净手术室 及分散布置送风口 的洁净室 |
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上表明确指出5级洁净度区域最少培养皿是13个；而含尘浓度的检测布点方法是（13.3.11.2）Ⅰ级手术室手术区5个，所以在测沉降菌的时候，Ⅰ级手术室手术区布点数应为13个。沉降菌最少培养皿数明确指出6级洁净度区域最少培养皿是4个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅰ级手术室周边区8个，所以Ⅰ级手术室周边区布点数应为8个，即Ⅰ级手术室沉降菌采样共需布21个点（不包括对照）。
沉降菌最少培养皿数指出6级洁净度区域最少培养皿是4个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅱ级手术室手术区3个，所以Ⅱ级手术室手术区布点数应为4个。沉降菌最少培养皿数指出7级洁净度区域最少培养皿是3个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅱ级手术室周边区6个，所以Ⅱ级手术室周边区布点数应为6个。即Ⅱ级手术室沉降菌采样共需布10个点（不包括对照）。
沉降菌最少培养皿数指出7级洁净度区域最少培养皿是3个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅲ级手术室手术区3个，所以Ⅲ级手术室手术区布点数为3个。沉降菌最少培养皿数指出8级洁净度区域最少培养皿是2个；而含尘浓度的检测布点方法是Ⅲ级手术室周边区6个，所以Ⅲ级手术室周边区布点数应为6个。即Ⅲ级手术室沉降菌采样共需布9个点（不包括对照）。
洁净手术室的等级标准(空态或静态)及沉降法测定细菌浓度布点
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等级 |
手术室名称 |
沉降法细菌最大平均浓度 |
空气洁净度级别 |
布点数 | |||
|
手术区 |
周边区 |
手术区 |
周边区 |
手术区 |
周边区 | ||
|
Ⅰ |
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0.2个/30min·φ90皿 |
0.4个/30min·φ90皿 |
5级 |
6级 |
13 |
8(每边内2点) |
|
Ⅱ |
|
0.75个/30min·φ90皿 |
1.5个/30min·φ90皿 |
6级 |
7级 |
4（四角布点) |
6(长边内2点，短边内1点) |
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Ⅲ |
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2个/30min·φ90皿 |
4个/30min·φ90皿 |
7级 |
8级 |
3(单对角线布点) |
6(长边内2点，短边内1点) |
|
Ⅳ |
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6个/30min·φ90皿 |
8.5级 |
| |||
注：1、采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上。(φ90，以沉降30min计)
2、检测细菌浓度，必须有2次空白对照。第1次对用于检测的培养皿做对比试验，即每次采样时留一个培养皿直接送培养并采取单盲法（即送检的人知道是对照而微生物实验室的人不知道）。第2次是在检测时，每室或每区1个对照皿，对操作过程做对照试验：模拟操作过程，但培养皿打开后即立即封盖。两次对照结果都必须为阴性。整个操作应符合无菌操作的要求。
3、 采样后的培养皿，应尽快置于37℃条件下培养24h，然后计数生长的菌落数。菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后1位。
4、当某个皿菌落数太大受到质疑时，应重测，如结果仍很大以两次均值为准；如果结果很小可再重测或分析判定。布皿和收皿的检测人员必须遵守无菌操作的要求。
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